我公司新品1，25雙羥基維生素D試劑盒操作簡(jiǎn)單方便，不需氮吹儀，現(xiàn)貨供應(yīng)，下面是介紹：

1、 1，25雙羥基維生素D試劑盒預(yù)期用途
運(yùn)用酶聯(lián)免疫法體外定量檢測(cè)血清中的1,25-二羥基維生素D的濃度。

2、 1，25雙羥基維生素D試劑盒基本信息

3、 1，25雙羥基維生素D試劑盒臨床背景
A． 1，25雙羥基維生素D試劑盒生物活性
維生素D主要由皮膚中的7-脫氫膽固醇合成，部分來(lái)源于飲食和補(bǔ)充劑。在肝臟中，維生素D的25位碳原子羥基化生成25-羥基維生素D。25-羥基維生素D進(jìn)一步在腎臟和其它組織代謝，羥基化生成有活性的維生素D，1,25-二羥基維生素D，作用于腸、腎臟、骨骼和其它組織器官。孕婦胎盤(pán)和結(jié)節(jié)病的巨噬細(xì)胞也產(chǎn)生1,25-二羥基維生素D。

1,25-二羥基維生素D是維生素D的活性形式，而25-羥基維生素D和維生素D本身是無(wú)活性的。1,25-二羥基維生素D促進(jìn)腸道對(duì)鈣、磷的吸收，促進(jìn)骨的吸收和礦化，從而防止佝僂病和軟骨病。1，25-二羥基維生素D存在于負(fù)責(zé)其轉(zhuǎn)運(yùn)的組織（胎盤(pán)、腎臟、乳腺…）和內(nèi)分泌腺，如甲狀旁腺。1,25-二羥基維生素D代謝快，在血中的半衰期大約12h，主要代謝產(chǎn)物是維生素D3-23羧酸，一個(gè)C-23的羧酸衍生物，沒(méi)有生物活性。另一條途徑，1,25-二羥基維生素D經(jīng)過(guò)24位-羥基化生成活性較低的1,24,25-三羥基維生素D，是一次要途徑。

1,25-二羥基維生素D在血清或血漿中的濃度比25-羥基維生素D低100到1000倍。由于濃度低及存在很多類(lèi)似物，測(cè)定1,25-二羥基維生素D需要層析柱提取和分離。

B．1，25雙羥基維生素D試劑盒臨床應(yīng)用
1,25-二羥基維生素D水平失常，影響鈣的代謝，如：磷代謝、類(lèi)肉狀瘤病，腎衰竭、甲旁亢和甲旁低、腫瘤引起的高鈣血癥、高鈣尿、維生素耐受功能障礙，抗驚厥藥物治療。

4、1，25雙羥基維生素D試劑盒檢測(cè)原理
樣本和質(zhì)控品需要經(jīng)過(guò)混合溶劑的提取和層析柱的分離，使1,25-二羥基維生素D和其它維生素D代謝物分開(kāi)，校準(zhǔn)品不需要經(jīng)過(guò)層析柱分離。之后，將校準(zhǔn)品、純化的樣本和質(zhì)控品直接加入包被1,25-二羥基維生素D的微孔板中孵育。

操作步驟 Ⅰ. 提取步驟：！只用于質(zhì)控品和樣本 1. 試管(12 x 75 mm)編號(hào)：2個(gè)質(zhì)控品和zui多40個(gè)樣本。 2. 每個(gè)試管中加入0.5 mL質(zhì)控品或樣本。 3. 每個(gè)試管中加入2 mL提取溶劑。 4. 蓋上試管蓋，1200 rpm振蕩1h。 5. 室溫下離心5min（800g）。 6. 上清液用于下一步分離。

Ⅱ. 分離步驟：！只用于質(zhì)控品和樣本。 1. 玻璃管(16 x 100 mm)或(12 x 120 mm)，或塑料管(falcon 2097)編號(hào)，用于層析：2個(gè)質(zhì)控品和zui多40個(gè)樣本。 2.每個(gè)管中放一個(gè)二氧化硅層析柱。 3.從層析柱上端加入1.6mL提取上清液（2 x 0.8mL），在重力作用下慢慢滴下。 4.1mL洗滌液洗層析柱參見(jiàn)試劑制備 ！注意：每個(gè)層析柱上不能出現(xiàn)真空，因?yàn)樾枰亓ψ饔谩?span style="font-family:arial"> 5.從層析柱上端加入500μL二氯甲烷，在重力作用下慢慢滴下。 6.從層析柱上端加入500μL蒸餾水，室溫離心5min（800g）。 7.試管(12 x 75 mm)編號(hào)，用于洗脫1,25-二羥基維生素D。離心后，將層析柱中的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的玻璃試管中。8.從每個(gè)層析柱上端加入300μL 洗脫液用來(lái)洗脫1,25-二羥基維生素D，然后室溫下離心5min（800g）。 9.混勻洗脫餾分。 注意：此步之后，樣本必須立即加入微孔板中孵育，防止樣本降解。 Ⅲ. 孵育 1.選擇所需數(shù)量的微孔進(jìn)行試驗(yàn)。未使用的微孔應(yīng)放回有干燥劑的包裝袋中封好，儲(chǔ)存在于2-8℃。 2.將微孔安裝到固定架上。 3.用旋渦混合器混勻校準(zhǔn)品、提取的質(zhì)控品和樣本。 4.加入150uL孵育緩沖液到所有的微孔中。 5.加入50uL的校準(zhǔn)品（未提?。?，洗脫的質(zhì)控品和樣本到對(duì)應(yīng)的微孔中。 6.用封板膜封閉或蓋上微孔板，2-8℃下孵育18±2h。 一夜孵育后，洗板前60min+/-15min準(zhǔn)備辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物工作液. 7.從每個(gè)微孔中吸出液體。 洗板3次： — 加入洗滌液0.35mL到每個(gè)微孔中 — 吸出各微孔中的溶液 8.加入200uL的辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物工作液到微孔板的每個(gè)微孔中。 9.用封板膜封閉或蓋上微孔板，4℃下孵育 1h。
10.從每個(gè)微孔中吸出液體。 洗板3次： — 加入洗滌液0.35mL到每個(gè)微孔中 — 吸出各微孔中的溶液 11.洗板后15分鐘內(nèi)，吸取200uL顯色溶液加入到每個(gè)微孔中。 12.室溫下，孵育15分鐘，避免陽(yáng)光直射。 13.在各微孔中加入100uL終止液。 14.在1小時(shí)內(nèi)，讀取450 nm下的吸光度值（參考波長(zhǎng)630nm或650nm）。